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本试剂盒采用通用T载体引物研制研制而成，只需购买一种试剂盒，便可用于市面上所有常见的T载体(包括pGEM，pUC，pBluescript系列)连接阳性克隆的鉴定。此外，采用T3,T7或者SP6做引物的菌落PCR鉴定试剂盒引物距离插入位点的距离非常短，因此在鉴定100bp左右或者更小片段的插入时，阴性克隆的引物二聚体条带和阳性克隆扩增条带大小接近，无法区分。往往把引物二聚体的条带看成是阳性扩增条带，造成假阳性。反之，造成假阴性。本试剂盒通用T载体引物在未插入片段时的距离至少有150bp以上，加上插入片段的长度，可以清晰的区分是插入片段扩增出的条带还是引物二聚体扩增出的条带。避免假阳性或者假阴性，大大提高了准确性。本公司研发的一管便携式PCR MasterMix预混系统，无需您一一加入各种成分，直接加入需筛选单菌落，经过1小时左右的PCR反应和电泳检测即可得到重组菌落鉴定的结果。

• 重组菌落鉴定时，挑取单菌落前，应先做好标记，便于鉴定后使用。
  
• 挑取菌落时，应选择单菌落，不要挑取太多菌体，以免影响PCR结果。
  
• 设定PCR程序时，请根据插入片段大小决定延伸时间，如果插入片段大小为1kb以下，延伸时间30～45秒即可，如果片段更长，可按此比例增加延伸时间。

• 按以下体系配好含有引物的1 x Taq MasterMix反应液。
  

  成分	用量
  2×Taq PCR MasterMix	12.5μL
  Universal primer F (10μM)	0.5μL
  Universal primer R (10μM)	0.5μL
  ddH2O	11.5μL

  
  
• 将过夜培养的平板上的菌落编号后，使用灭菌的枪头挑取一部分单菌落加入上述反应液，吹打混匀使菌落充分分散到反应液中。
  可多设置一管不加菌落的阴性对照，以便于分析实验结果。
  
• 将PCR管置于热循环仪上按以下条件开始反应，推荐条件如下：
  

  温度	时间	循环数
  94℃	5min	1
  94℃	30sec	30-33
  55℃	30sec
  72℃	0.5～1min
  72℃	5min	1

  注意：延伸时间请根据插入片段大小调整。
  
• 反应结束后，取5～10μL直接上样电泳检测。